Trotz der bisherigen wissenschaftlichen und klinischen Fortschritte ist es bis heute nicht detailliert geklärt, welche Faktoren für die Rekonstruktion und Er-haltung der beschädigten Cornea verantwortlich sind. Daher ist es immer noch von großem Interesse die Identität und Funktionsweise der Stamm- und Vorläuferzellen des Limbus zu untersuchen, und so die Therapiemöglichkeiten für Patienten mit LSCD weiter verbessern zu können. Daher stellte das erste Ziel der vorliegenden Arbeit die Generierung eines neuen Doxyzyklin-induzierbaren, lentiviralen Vektors zur Aufreinigung von label-retaining-Zellen dar. Die bisher generierten Ergebnisse an humanen Limbuszellen zeigen, dass dieser Vektor dazu verwendet werden kann eine Population von Zellen mit einem langsameren Zellzyklus zu identifizieren. Zur anschleißenden Validierung des Stammzellpotentials der unterschiedlichen Subpopulationen müssen nachfolgend funktionelle Untersuchungen durch-geführt werden. Ist die Population mit dem größten Stammzellpotential identifi-ziert, könnten sich nachfolgende Experimente mit der genaueren Charakteri-sierung dieser Population befassen. Die Vorteile des label-retaining-Vektors liegen in der stabilen Transduktion, der strengen Regulierbarkeit durch Doxyzyklin, sowie der simplen Detektierbarkeit des GFP im Gegensatz zur aufwändigen Immunfluoreszenz-basierten Detektion bei BrdU. Dieser Vektor stellt ein neues Werkzeug zur Aufreinigung von lebensfähigen putativen Stamm- und Vorläuferzellen der Cornea innerhalb einer Population von LRZ dar. Eine Anwendung zur Untersuchung von Stammzellpopulationen in vielen anderen Geweben ist ebenfalls möglich. Ein weiterer Ansatz für die Behandlung von LSCD ist die Generierung von iPS-abgeleiteten Transplantaten. Die Reprogrammierung von Patienten-eigenen Hautfibroblasten zu iPSZ stellt für Patienten mit bilateraler LSCD ei-nen guten Therapieansatz dar. Aus einer minimalinvasiv gewonnenen Hautstanze werden zunächst reprogrammierbare Fibroblasten herangezogen. So-bald aus diesen iPSZ generiert wurden, könnten diese dann gezielt zu hCEZ differenziert werden um so ein patienten-spezifisches Transplantat zu erhalten. Daher wurden im zweiten Teil dieser Arbeit hESZ gezielt zu Zellen des Corneaepithels differenziert und dabei der Einfluss verschiedener Transkripti-onsfaktoren auf die Differenzierung untersucht, um so Erkenntnisse darüber zu gewinnen, welche regulatorische Mechanismen an der Entstehung von Cornea-Epithelzellen beteiligt sind. Diese Erkenntnisse könnten dazu genutzt werden, um die Generierung iPS-basierter Transplantate zur Behandlung der LSCD zu verbessern. Zunächst konnte jedoch festgestellt werden, dass die ektope Expression von wichtigen Transkriptionsfaktoren der Augenmorphogenese nicht dazu geeignet ist, die Effizienz dieser Differenzierung zu steigern. Vielmehr zeigte insbesondere die Expression unter dem methylierungsprotektiven Einfluss des UCOE-Elements, dass die ektopte Expression dieser Tran-skriptionsfaktoren keinen gezielten Effekt auf die Differenzierung hat. Die untersuchten Transkriptionsfaktoren sind an vielen verschiedenen Prozessen der Augenmorphogenese beteiligt, sodass die Begünstigung des cornealen Zellschicksals nicht auf diesem Wege spezifisch begünstigt werden kann. Wird dieser Ansatz jedoch mit verfeinerten Methoden, wie z. B. induzierbaren Vektoren und Reportersystemen weiterverfolgt, so können neue Erkenntnisse zu diesem Thema gewonnen werden. Der dritte Teil dieser Arbeit beschäftigte sich mit der Anreicherung der spontan während der direkten Differenzierung entstandenen Pigmentzellen. Diese konnten nachfolgend RPE-Zellen identifiziert und gezielt angereichert wer-den. Dabei stellte sich heraus, dass die mit SIX1 bzw. SIX1-UCOE transduzierten hESZ im Verlauf der Differenzierung signifikant mehr RPE-Zellen hervorbrachten. Die Anreicherung dieser Zellen verlief, unabhängig von dem exprimierten Transkriptionsfaktoren, erfolgreich. Dies kann als Hinweis darauf ein-geordnet werden, dass SIX1 eine Rolle während der Entscheidung über das Zellschicksal zugunsten der RPE-Zellen spielt, nicht jedoch darüber hinaus. Außerdem wiesen die RPE-Zellen, welche aus den SIX2-exprimierenden hESZ abgeleitet wurden, hohe relative Transkriptmengen des Gens RLBP1 auf. Da es sich hierbei um ein für den Sehzyklus unabdingares Gen handelt, sollte in folgenden Experimenten der Zusammenhang zwischen SIX2 und RLBP1 tiefergehend untersucht werden. Außerdem zeigte sich in einem Pilotversuch, dass von den hier generierten RPE-Zellen ausschließlich die ITGB4-positiven Zellen die typische Morphologie und Pigmentierung der RPE-Zellen aufwiesen und zudem eine höhere Expression von RPE-typischen Genen zeigten. Im Hinblick darauf, dass seit Jahren mit Hochdruck daran geforscht wird, gezielt aus patienteneigenen iPSZ transplantierbare RPE-Zellen für die Behandlung der AMD zu gewinnen, können die Ergebnisse der vorliegenden Arbeit als Ansatzpunkt für nachfolgende Untersuchungen genutzt werden, welche zur Verbesserung dieses Therapieansatzes beitragen können.